在生物医学领域，甘油菌种的复苏与保存是确保细胞活性和纯度的关键步骤。这一过程包括菌种的保存、复苏及再次保存，下面将详细介绍每个步骤及注意事项。

菌种保存

首先，将菌种接种于LB液体培养基中，并在对数生长期，即培养体系内可见浑浊时进行保存。准备一个50%浓度的甘油溶液，可以通过等体积的蒸馏水与甘油相混合而成。在无菌条件下，将菌液与50%甘油按1:1的比例混合，使甘油最终浓度达到25%。接着，将混合液转移到2ml的离心管中，放入-20°C的冰箱保存。在这种条件下，菌种的保存有效期为1年。如果需要长期保存，建议在-70°C或-80°C下冷冻保存，保藏时间一般为2到4年左右。

菌种复苏

在使用前，将保存的菌种在30°C的水浴中解冻。解冻后，将菌液接种到固体培养基上，并在适宜条件下培养24到48小时，以恢复菌种的活性。

再次保存

复苏后的菌种可以在新的液体培养基中继续培养，并再次进行甘油保存。这一过程确保了菌种的长期保存及其可用性，是生物医学研究中不可或缺的一部分。

注意事项

在实施上述步骤时，务必确保所有使用的工具和容器经过适当的灭菌处理，以避免出现污染。在操作过程中保持无菌环境，防止外界微生物的入侵。正确的方法不仅对维护菌种的活性和纯度至关重要，同时也响应了生物医疗的高标准要求。此外，保存温度对于菌种的长期存活影响巨大，低温条件有助于延长保存时间。

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