一、细胞培养条件

细胞名称：人早幼粒白血病细胞HL60
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：IMDM+20%FBS+1%P/S
传代方法：第一次建议1:2传代。
传代情况：2天换液。
备注：用无菌离心管收集瓶中培养基，以便进行对比培养。如对比培养效果不佳，建议直接购买Z6·尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后处理

在细胞培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内严格遵循无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。请用显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据。如果未提供照片，将默认为收到状态良好。建议传代时，一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞未超过80%汇合度，将瓶中的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基于37℃、5%CO2孵箱培养；若细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速返回操作台，轻敲瓶底后加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出悬液，转移至15ml离心管中，1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，然后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使其脱落，将悬液转移至15ml离心管中，以1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中储存，如需将细胞转入液氮罐，需在-80℃冰箱中保存24小时以上再转入液氮罐中。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），快速置入37℃水浴中解冻，直至无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。
4. 次日更换新鲜完全培养基以继续培养。

四、注意事项

某些细胞可能无法牢固贴壁，运输过程中可能会发生细胞脱落，这属于正常现象。如脱落明显，将培养瓶内所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟，收集上清作过渡培养。沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再进行离心，以弃去上清并重悬于1-2ml完全培养基。最后按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5%CO2细胞培养箱中继续培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题，可重发的情况：
- 运输过程中的各种问题，例如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重泄漏等，均可重发；
- 出现细胞污染，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后可重发；
- 常温发货的细胞在静置24小时后，及干冰冻存发货的细胞在复苏后24小时内绝大多数细胞未存活（需提供清晰的细胞状态照片），可重发；
- 冻存的细胞在复苏后24小时或常温发货的细胞在静置4小时后未开封出现污染，可以重发；
- 细胞活性问题，请在收到产品7天内提供真实实验结果，并用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后可重发；
- 收到细胞当天及第2、3天请务必拍照，3天未通知的视为产品合格。若在4-7天内出现问题，需提供收到细胞前3天的照片，和问题发生时的照片及操作详细步骤，经过技术人员评估如属我方责任可重发。如技术人员判定责任双方承担，由双方协商处理或者按照合同价收取50%费用重发。

2）细胞出现问题，不予重发的情况：
- 客户造成细胞污染的，不可重发；
- 客户操作不当导致细胞状态不良的，不可重发；
- 非本库推荐的细胞培养体系造成细胞状态不良的，不可重发；
- 收到细胞状态不佳，未提供前三天的照片的，不可重发；
- 细胞培养时进行其他处理的，不可重发；
- 细胞在收到2天内未告知的，不可重发；
- 视具体情况而定。